Grunnskilyrði fyrir frumurækt
1. Viðeigandi frumuræktunarmiðill
Hentugur frumuræktunarmiðill er eitt mikilvægasta skilyrði fyrir frumuvöxt og frumufjölgun in vitro. Ræktunarmiðillinn veitir ekki aðeins frumunæringu og grunnefni til að stuðla að frumuvexti og fjölgun, heldur veitir hann einnig lifandi umhverfi fyrir vöxt og æxlun ræktaðra frumna.
2. Hágæða sermi
Sem stendur þurfa flestir gerviefni að bæta við sermi. Sermi er einn mikilvægasti þátturinn í frumuræktunarmiðli, sem inniheldur ýmsa vaxtarþætti og önnur næringarefni sem nauðsynleg eru fyrir frumuvöxt.
3. Stöðugt frumuvaxtarhitastig
Til að viðhalda kröftugum vexti ræktaðra frumna verður að vera stöðugt og viðeigandi hitastig.
4. Hentugt gas umhverfi
Gas er eitt af nauðsynlegum skilyrðum fyrir lifun spendýrafrumna og nauðsynlegar lofttegundir eru aðallega súrefni og koltvísýringur.
5. Frumuræktunarhitastig
Til að viðhalda kröftugum vexti ræktaðra frumna þarf að vera stöðugt og hæfilegt hitastig. Mismunandi gerðir frumna hafa mismunandi kröfur um ræktunarhitastig. Venjulegt hitastig fyrir frumuræktun manna er 36,5 gráður ± 0,5 gráður. Frávik frá þessu hitastigi mun hafa áhrif á eðlileg efnaskipti frumna og jafnvel deyja.
6. Hentugt gas umhverfi
Gas er eitt af nauðsynlegum skilyrðum til að lifa af frumuræktun spendýra og nauðsynlegar lofttegundir eru aðallega súrefni og koltvísýringur. Súrefni tekur þátt í tríkarboxýlsýruhringnum, framleiðir orku fyrir frumuvöxt og útbreiðslu og myndar ýmsa þætti sem nauðsynlegir eru fyrir frumuvöxt.
Algeng mengun frumuræktar
1. Bakteríumengun
Bakteríumengun er algengust. Þegar aðgerðin er aðeins óviðeigandi mun hún valda frumumengun. Eftir bakteríumengun mun það birtast sem svartar þunnar ræmur af sandi þegar það er skoðað undir smásjá. Staflaga o.s.frv. Í öðru lagi verður ræktunarmiðillinn gulur og gruggugur og fínt sandlaga set sést vel í petrískálinni og undarleg lykt kemur af og til.
2. Sveppamengun
Sveppamengaða ræktunarlausnin er tær og gagnsæ, ekki eins og stór bakteríusýkingarfaraldur, svo það er erfitt að greina hana snemma. Stundum lítur það út eins og þráður undir smásjánni, stundum lítur hann út eins og kórall og hægt og rólega mun mjög þunnur svartur þráður vaxa. Þetta Þegar það er of seint er erfitt fyrir frumurnar að bjarga.
3. Myglusmengun
Í samræmi við sveppasýkingar, vegna þess að ræktunarefnið er tært, er erfitt að greina sveppamengun snemma, þegar það er oft of seint. Flokkandi óhreinindi komu hægt og rólega fram í ræktunarmiðlinum og hægt var að sjá þráðlaga massa fljótandi hluti í smásjánni, eins og rjúpur í vindi. Frumur geta enn vaxið, en með tímanum rýrna frumurnar og hætta að vaxa.
4. Mycoplasma sýking
Ræktunarmiðillinn verður gruggugur. Eftir að mycoplasma sýkir frumurnar eru frumubreytingar ekki augljósar en frumuástandið versnar og vöxturinn hægir á sér. Það geta verið litlir svartir blettir undir smásjánni en ræktunarefnið er almennt ekki gruggugt. Eftir að frumurnar voru komnar yfir komu svartir blettir á milli frumna, frumur voru loftræstir og margar frumur líktust frumufrumu og drepi. Að lokum flautu frumurnar og dóu alveg.
Forvarnir gegn frumumengun
Með því að koma á góðum reglum og reglugerðum er hægt að draga úr frumumengun. Þar á meðal aðgangskerfi, rekstrarreglur og daglegt stjórnkerfi.
Aðgangskerfi: þar á meðal starfsfólk og efni. Starfsfólk þarf að fá þjálfun áður en það getur starfað sjálft og það verður að uppfylla kröfur um klæðnað áður en farið er inn á rannsóknarstofuna, svo sem hvítar yfirhafnir, einangrunarsloppar, grímur, hanskar o.s.frv. sótthreinsuð og sótthreinsuð, og keyptir hlutir þurfa að vera keyptir frá venjulegum og áreiðanlegum rásum. Nýkeyptar frumur ættu að prófa og sannreyna fyrir notkun.
Rekstrarforskriftir: Best er að móta forskriftir fyrir venjubundnar aðgerðir og starfsfólk rannsóknarstofu verður að fylgja rekstrarforskriftum, sem ekki er hægt að breyta að vild, og temja sér einnig góðar rekstrarvenjur fyrir starfsfólk rannsóknarstofu. Til dæmis, eftir að pípettuoddurinn er sogaður, mun hann ekki teygjast inn í miðilinn í annað sinn og nægilegt magn af miðli verður sogið einu sinni. Þegar vökva er bætt við skal bæta vökvanum í sviflausn eins mikið og mögulegt er, sem getur í raun komið í veg fyrir mycoplasma-mengun og frumumengun. Að auki, ef mögulegt er, starfrækið aðeins eina frumulínu í einu, og það er betra að hafa smá tíma á milli frumna til að forðast krossmengun.
Daglegt stjórnkerfi: Það felur í sér reglur og aðferðir við notkun, hreinsun og viðhald á umhverfinu og rekstrarvörum, hvarfefnum o.fl. Það eru einnig stjórnun á neyslu, birgðum og öflun hvarfefna og rekstrarefna, þar á meðal tveggja þrepa birgðastjórnun á frumusýni. Fyrir þá mengunaruppsprettu sem ekki er auðvelt að finna er best að gera reglulegar prófanir, aðallega mycoplasma mengun og frumumengun.
BKMAM Bio útvegar samsvarandi rekstrarvörur fyrir frumurækt:
Einnota, kringlótt/ferkantaður petrídiskar úr plasti:
Hár gagnsæ pólýstýren efni (PS);
Yfirborðið er slétt og flatt og það er engin sjónræn röskun á frumum undir smásjá;
Stöfluhönnun gerir stöflun og geymslu auðveldari;
Etýlenoxíð dauðhreinsun (EO);
Slit- og tæringarþol.
Fylgjandi meðferð á frumuræktunardiskum:
Pólýstýren efni (PS);
Ófrjósemisaðgerð rafeindageisla, ekkert pýrógen, ekkert eiturefni;
Tómarúm plasma yfirborðsmeðferð, framúrskarandi frumuviðloðun;
Yfirborðið er slétt og flatt og það er engin sjónræn röskun á frumum undir smásjá;
Staflanleg hönnun auðveldar stöflun og geymslu.
Plastfrumuræktunarplötur:
Pólýstýren efni (PS);
Hentar fyrir eðlilega frumurækt, ekki viðloðandi meðferðarplötugerð;
Ekkert pýrógen, ekkert eiturefni, dauðhreinsað;
Auðvelt, óháð umbúðir, auðvelt í notkun;
Meðhöndlun á frumuræktarplötum með viðloðandi hætti:
Pólýstýren efni (PS);
Viðloðandi meðferð (TC meðferð) plötutegund, hentugur fyrir ræktun viðloðandi frumna;
Ekkert pýrógen, ekkert eiturefni, dauðhreinsað;
Auðvelt, óháð umbúðir, auðvelt í notkun;
Allir eru flatir botnar.
Meðhöndlun á frumuræktunarflöskum:
Pólýstýren efni (PS);
Ófrjósemisaðgerð rafeindageisla, ekkert pýrógen, ekkert eiturefni;
Tómarúm plasma yfirborðsmeðferð, framúrskarandi frumuviðloðun;
Andar hlíf, sem stuðlar að gasskiptum og kemur í veg fyrir að örverur fari í gegn.
Innri/ytri snúningur:
100 prósent hreint pólýprópýlen efni (PP);
Þolir 15psi, 121 gráðu dauðhreinsun;
Slönguveggurinn er þykkur og slönguhlutinn hefur mælikvarða og skrifsvæði;
Það er kísillhring innsigli á milli pípuhlífarinnar og pípuhlutans til að tryggja þéttleika;
Enginn DNasi, enginn RNasi, ekkert pýrógen, ekkert endotoxín.
