ELISA með slæmum árangri?Fylgdu okkur til að velja réttan Elisa disk.
Að velja viðeigandi ELISA plötu er fyrsta skrefið að árangursríkri ELISA tilraun, en margir hunsa þetta. Þegar fólk gerir tilraunir tekur það oft aðeins fyrir tilrauninni sjálfri en veit ekki að varan hefur oft mikil áhrif á tilraunina. Rétt val á vörum mun stuðla að árangri tilraunarinnar. Við höfum venjulega eftirfarandi þætti í huga þegar við gerum ELISA tilraunir:
1.Lögun botnsins
Sem stendur hanna framleiðendur ensímmerktu holurnar sem sjálfstæðar súlur og auka á viðeigandi hátt fjarlægðina á milli holanna þannig að hægt sé að aðskilja þær sjálfstætt og lágmarka þar með krossmengun. Mismunandi gerðir af Elisa plötum hafa mismunandi lögun á brunnbotninum. Hér eru nokkrar algengar holubotnformar:
Flatur botn: Botninn er láréttur, einnig kallaður F botn. Ljósið mun ekki sveigjast í gegnum botninn, sem getur sent ljósið að mestu leyti. Notaðu fyrir tilraunir sem krefjast hringlaga botns af sýnileika eða af öðrum ástæðum.
Hringlaga botn: Einnig þekktur sem U-botn, veitir bestu hreinsunarárangur og blendingaafköst, hentugur fyrir forrit sem þurfa að prófa setlög.
C-botn: Það getur veitt góð hreinsunaráhrif milli flata botnsins og hringlaga botnsins, en sameinar kosti flata botnsins.
Keilubotn: Einnig þekktur sem V-botn, hann er hentugur fyrir nákvæma sýnatöku og geymslu á örsýnum fyrir hámarks endurheimt á litlu magni.
2. Liturinn á Elisa disk
Það eru þrír litir á Elisa plötunni: gagnsæ, svartur og hvítur.
Meirihluti ELISA velur gagnsæjar plötur sem tilraunaefni. Hvítar og svartar Elisa plötur eru almennt notaðar til að greina ljóma. Svarta ELISA-platan sjálf gleypir ljós, þannig að merki hennar er veikara en hvíta ELISA-platan. Black Elisa plötur eru almennt notaðar til að greina sterkara ljós, svo sem flúrljómun; Þvert á móti er hægt að nota hvítar Elisa plötur fyrir veikari ljósgreiningu og eru þær oft notaðar fyrir almenna efnaljómun og litaþróun undirlags (eins og tvískiptur lúsiferasa). greiningu fréttamanns).
3. Efni Elisa plötu
Algeng efni eru pólýetýlen (PE), pólýprópýlen (PP), pólýstýren (PS), pólývínýlklóríð (PVC) og pólýkarbónat (PC).
Mest notuð efni í ELSIA eru pólýstýren og pólývínýlklóríð. Mjúkt pólývínýlklóríð borð er þunnt, hægt að skera það og verðið er lágt. Ókosturinn er sá að frágangurinn er ekki eins góður og pólýstýrenplatan og botn holunnar er ekki eins flatur og pólýstýren. En samsvarandi bakgrunnsgildi mun einnig hækka. Venjulega er jónagræðslumeðferð framkvæmd á yfirborði ELISA plötunnar og virkir virkir hópar eins og aldehýðhópar, amínóhópar og epoxýhópar eru settir inn í fjölliðayfirborðið til að bæta frammistöðu undirlagsyfirborðsins.
4. mismunandi bindingaraðferðir
Skilvirk binding húðunarefnisins við botnflöt plötunnar er mikilvægt skref í ELISA. Þess vegna ætti að greina byggingareiginleika og efnafræðilega eiginleika efnisins sem á að húða vandlega fyrir tilraunina til að velja viðeigandi Elisa plötu. Almennt séð eru nokkrar leiðir til að binda húðunarefnið við botn plötunnar: óvirkt aðsog, samgild binding og sæknifanga.
Óvirkt aðsog: Verkunarháttur óvirkrar aðsogs er flókinn og bindingin milli húðunarefnisins og botns plötunnar byggist aðallega á millisameindakrafta (van der Waals kraft) og vetnistengi. Í flestum ELISA er binding húðunarefnisins við botn plötunnar framkvæmt með óvirku aðsogs. Almennt er binding milli miðlungs og stórrar mólþunga mótefnavaka (eða mótefna) og botns plötunnar náð með óvirku aðsogs. Vatnsfælnir/vatnssæknir eiginleikar neðsta yfirborðs plötunnar eru oft skoðaðir þegar Elisa plötu er valin. Eftirfarandi tafla sýnir umfang notkunar og notkun mismunandi vatnssækinna undirlagsyfirborða:
vatnssækinn | Forgangsbinding | Aðalnotkunin |
- | Sameindir sem innihalda mikilvæg vatnsfælin svæði, svo sem: lípíð, lípóprótein, stór prótein | Mótefnavaka ELISA, FlA, LIA |
plús | Lífsameindir með vatnssækna/vatnsfælna eiginleika eins og: meðalstór til stór prótein, immúnóglóbúlín, albúmín | Double Antibody Sandwich ELISA, Antigen ELISA |
plús plús | Lífsameindir með vatnssækna/vatnsfælna eiginleika eins og: lítil til stór prótein, immúnóglóbúlín, albúmín, LPS, fosfórýleruð prótein, glýkóprótein | Tvöfalt mótefni ELISA, FIA, LIA |
plús plús plús | Glýkóprótein, skautaðar lípíðsameindir, fosfólípíð, hjartalípíð | Mótefnavaka ELISA |
Sæknifanging: Sæknifanging byggist á sértækri bindingu merktra stórsameinda við samsvarandi viðtaka þeirra. Merktar stórsameindir er hægt að fá annað hvort með efnatengingu eða með erfðatækni.
Eiginleikar Affinity Capture eru:
1.há sérhæfni
2.Getur bætt merki-til-suð hlutfall mæliniðurstaðna
Algengustu yfirborð brunnanna eru: streptavidin (streptavidin) húðað yfirborð; nikkel chelate (Nickel Chelate) húðað yfirborð og glútaþíon (Glutathione, GSH) húðað yfirborð.
3. Streptavidin yfirborð: Mikil sækni og sérhæfni streptavidins og biotins eru notuð til að átta sig á bindingu botnplötunnar við húðaða próteinið.
4. Nikkel chelate yfirborð: Nikkel chelate er fest við fjölliða yfirborðið til að binda samrunaprótein með His (histidín) merkjum.
5. Glútaþíonyfirborð: Notkun á ensím- og hvarfefnissérhæfni milli glútaþíon og glútaþíon súlfhýdrýltransferasa (GST) til að ná fram bindingu botnplötunnar við hjúppróteinið.
Af hverju að velja BKMAM Elisa disk?
Gert úr 100 prósent pólýstýren efni,
Hentar fyrir viðloðandi frumurækt,
Flatur grunnur, jöfn þykkt og samræmd stærð fyrir viðbragðsskauta,
Dauðhreinsuð með stakri pakkningu,
Hágæða með verksmiðjuverði.
